SMN1定量分析方法和基于实时SMN2 lightCycler PCR:快速和高度可靠载体检测和预测的脊髓性肌肉萎缩症的严重性
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- PMID:11791208
- PMCID:PMC419987
- DOI:10.1086/338627
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SMN1定量分析方法和基于实时SMN2 lightCycler PCR:快速和高度可靠载体检测和预测的脊髓性肌肉萎缩症的严重性
是J哼麝猫。
2002年2月。
免费的PMC的文章
文摘
脊髓性肌萎缩(SMA)是一种常见的常染色体隐性障碍在人类中,纯合缺失引起的运动神经元生存基因1 (SMN1)。SMN2基因的一个副本,影响SMA的严重程度和可用于体细胞基因治疗的患者SMA在未来。提出了一种新的、快速、高度可靠的定量测试,根据实时放大SMN1或SMN2 LightCycler PCR。SMN1副本329年测定和验证运营商和控制。测试的特异性为100%,而灵敏度为96.2%。SMN2副本的定量分析与I型375例,II型或III型SMA之间表现出显著相关性SMN2 SMA的拷贝数和类型以及持续时间的生存。因此,80%的I型SMA患者携带一个或两个SMN2册,和82%的II型SMA患者携带三SMN2副本,而96%的患者III型SMA携带三个或四个SMN2副本。在113 I型SMA患者,9与一个SMN2复制生活< 11 mo, 88/94两个住SMN2基因时< 21 mo, 8/10有三个SMN2副本住33 - 66钼。SMN2拷贝数的基础上,我们计算后验概率,一个孩子SMN1将开发I型纯合子缺失,II型,或III型SMA。
数据
荧光与周期数,融化的山峰,和新的SMN2点突变序列。一个,SYBR荧光绿色我阴谋与周期数产生的基因组DNA扩增(外部标准;0.5圣,圣圣2,圣3)的影响个人携带两种SMN2 SMN1副本和纯合缺失。此外,四个负控制(三SMA患者纯合缺失的SMN1和一个水控制)进行了测试。斜率=−4.112、错误= 0.0279
r= -1.00 。b,SYBR荧光绿色我阴谋与周期数产生的基因组DNA扩增(外部标准;圣,圣2、圣4、圣8)的SMA患者四SMN2 SMN1副本和纯合缺失。此外,四个负控制(三个正常个体的纯合缺失SMN2和一个水控制)进行了分析。斜率=−4.057、错误= 0.0469
r= -1.00 。c,我规范化SYBR绿色荧光的SMN1外部标准(st)和运营商的样本(C)和控制(ctr)与一个,两个,三个SMN1副本。每个拷贝数中检测出三种不同的DNA样本。斜率=−3.860、错误= 0.0213
r= -1.00 。d,规范化SYBR我绿色荧光的外部标准(st) SMN2和I型患者,II型,和III型SMA与一个,两个,三个,四个SMN2副本。斜率=−3819、错误= 0.0181
r= -1.00 。e,SMN2熔化曲线分析,杂交探针表明突变892 g→C。SMA患者的DNA与892 g→C突变纯合子SMN2显示了低熔点(m / m,
T
米= 58.0 °C)比野生型的SMA患者SMN2序列(w / w,
T
米= 64.5 °C)。SMA患者杂合的基因型(w / m)显示两座山峰。f,新基因内SMN2基因突变892 g→C SMA患者,发现通过测序DNA样本和融化的峰值为58.0°C。反向核苷酸序列基因组PCR直接测序得到的产品从4437年病人(杂合的)和4929(纯合子)突变892 g→C;箭头指示的位置突变。
情节的平均为载体(SMN1值
N= 124 ),非携带者(影响同胞的SMA患者)(
N= 65 )和控制(
N= 140 )。
图I型患者的频率、类型II和III型SMA和SMN2拷贝数。
一个,时代生存的I型SMA患儿,与平均SMN2价值。圆圈对应一个SMN2复制,广场两个SMN2副本,三角形三个SMN2副本。线代表一个时代的趋势线生存与SMN2拷贝数。b,kaplan meier曲线显示的生存概率I型SMA患者携带一个,两个,三个SMN2副本。
评论
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SMN剂量分析和风险评估脊髓性肌萎缩。J哼麝猫。2002年6月,70 (6):1596 - 8;作者回复1598 - 9。doi: 10.1086/340789。 2002年J哼麝猫。。 PMID:11992267 免费的PMC的文章。 没有可用的抽象。
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