体内Synucleinopathies的诊断gydF4y2Ba
皮肤活检和RT-QuIC的比较研究gydF4y2Ba
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文摘gydF4y2Ba
客观的gydF4y2Ba确定(1)免疫荧光是一种可再生的技术在检测错误折叠α-synuclein皮肤神经和随后是否(2)免疫荧光和实时quaking-induced转换(RT-QuIC)(在皮肤和CSF)显示一个类似体内诊断准确性在区分synucleinopathies non-synucleinopathies群体的病人。gydF4y2Ba
方法gydF4y2Ba我们前瞻性地招募了90名患者完成临床和仪器诊断标准为所有synucleinopathies变异和non-synucleinopathies (tauopathies,主要包括阿尔茨海默病和血管性帕金森症或痴呆)。24例主要是周围神经病变患者作为控制。病人接受了免疫荧光和RT-QuIC皮肤活检;CSF在病人腰椎穿刺检查诊断的目的。免疫荧光和RT-QuIC分析了盲法临床诊断。gydF4y2Ba
结果gydF4y2Ba免疫荧光显示2对邻近皮肤样品之间的可重复的结果。免疫荧光和RT-QuIC显示高敏感性和特异性识别synucleinopathies non-synucleinopathies和控制但免疫荧光诊断准确性较高。免疫荧光呈现良好的协议与RT-QuIC synucleinopathies皮肤和CSF。gydF4y2Ba
结论gydF4y2Ba免疫荧光和RT-QuIC显示诊断精度高,虽然免疫荧光显示更好的价值以及最佳再现性;他们提出了一个好的synucleinopathies协议,支持使用微创测试如皮肤免疫荧光或RT-QuIC代替CSF RT-QuIC synucleinopathies作为诊断工具。gydF4y2Ba
证据的分类gydF4y2Ba这项研究提供了第三类证据表明免疫荧光或RT-QuIC准确区分synucleinopathies non-synucleinopathies。gydF4y2Ba
术语表gydF4y2Ba
- 广告gydF4y2Ba=gydF4y2Ba
- 阿尔茨海默病gydF4y2Ba;gydF4y2Ba
- 肌萎缩性侧索硬化症gydF4y2Ba=gydF4y2Ba
- 肌萎缩性脊髓侧索硬化症gydF4y2Ba;gydF4y2Ba
- 非盟gydF4y2Ba=gydF4y2Ba
- 属性单元gydF4y2Ba;gydF4y2Ba
- 生物多样性公约gydF4y2Ba=gydF4y2Ba
- corticobasal综合症gydF4y2Ba;gydF4y2Ba
- 下文gydF4y2Ba=gydF4y2Ba
- 路易体痴呆与gydF4y2Ba;gydF4y2Ba
- MSAgydF4y2Ba=gydF4y2Ba
- 多系统萎缩gydF4y2Ba;gydF4y2Ba
- p-syngydF4y2Ba=gydF4y2Ba
- 磷酸化α-synucleingydF4y2Ba;gydF4y2Ba
- 拥堵的gydF4y2Ba=gydF4y2Ba
- 纯自主失败gydF4y2Ba;gydF4y2Ba
- PDgydF4y2Ba=gydF4y2Ba
- 帕金森病gydF4y2Ba;gydF4y2Ba
- PSPgydF4y2Ba=gydF4y2Ba
- 进行性核上的麻痹gydF4y2Ba;gydF4y2Ba
- RBDgydF4y2Ba=gydF4y2Ba
- REM睡眠行为障碍gydF4y2Ba;gydF4y2Ba
- RT-QuICgydF4y2Ba=gydF4y2Ba
- 实时quaking-induced转换gydF4y2Ba;gydF4y2Ba
- TBSgydF4y2Ba=gydF4y2Ba
- Tris-buffered盐水gydF4y2Ba;gydF4y2Ba
- ThT基金会gydF4y2Ba=gydF4y2Ba
- Thioflavin TgydF4y2Ba
synucleinopathies的诊断主要根据临床标准,导致频繁的误诊,所强调的解剖研究。gydF4y2Ba1gydF4y2Ba,gydF4y2Ba- - - - - -gydF4y2Ba,gydF4y2Ba3gydF4y2Ba
最新进展的发展已经由测试能够检测体内病理α-synuclein如免疫荧光分析皮肤的神经gydF4y2Ba4gydF4y2Ba,gydF4y2Ba- - - - - -gydF4y2Ba,gydF4y2Ba8gydF4y2Ba和实时quaking-induced转换(RT-QuIC)脑脊液。gydF4y2Ba9gydF4y2Ba,gydF4y2Ba10gydF4y2BaRT-QuIC的一个重要优点是可以执行的同步分析等不同的样本相同的病人容易皮肤与CSF获得通过入侵过程虽然直接比较研究尚未报道。gydF4y2Ba
免疫荧光和RT-QuIC探索病理α-synuclein的不同方面。免疫荧光可以检测皮肤神经病理形态学的总量而RT-QuIC可以确定他们播种活动,一个prion-like错误折叠蛋白质的生物学特征。因此,每个测试的诊断准确性披露的病理形态α-synuclein可能不同但直接比较是没有可用的。gydF4y2Ba
本研究旨在建立免疫荧光和随后的再现性比较免疫荧光诊断准确性和RT-QuIC作为synucleinopathies生物标志物。具体来说,本研究旨在比较(1)的敏感性和特异性免疫荧光和RT-QuIC披露不同变体的病理α-synuclein synucleinopathies和(2)诊断的准确性在披露的播种活动病理α-synuclein RT-QuIC皮肤样品vs CSF。gydF4y2Ba
方法gydF4y2Ba
我们前瞻性地筛选IRCCS神经科学研究所的博洛尼亚(意大利),从2018年到2020年,连续100年可能的神经退行性疾病患者;只有90达到高水平的诊断精度满足当前临床诊断标准和工具特定α-synucleinopathies或non-synucleinopathies参与了这个研究。免疫荧光结果的再现性是确定在21个病人:9 synucleinopathies(4完成诊断标准对帕金森病(PD),gydF4y2Ba11gydF4y2Ba4可能多系统萎缩(MSA),gydF4y2Ba12gydF4y2Ba和1与路易体痴呆(下文)gydF4y2Ba2gydF4y2Ba)和12 non-synucleinopathies(1完成阿尔茨海默病(AD)的诊断标准,gydF4y2Ba13gydF4y2Ba8为进行性核上的麻痹(PSP),gydF4y2Ba14gydF4y2Ba和3 corticobasal综合症(CBD)gydF4y2Ba15gydF4y2Ba)。免疫荧光和RT-QuIC然后比较在一个额外的69名患者。包括31名患者synucleinopathies: 17与PD,与下文5,与可能的MSA 8, 3纯自主失败(PAF)参谋长gydF4y2Ba12gydF4y2Ba;患者和38 non-synucleinopathies,包括15与典型的CSF发现,广告gydF4y2Ba13gydF4y2Ba6与血管性帕金森症,gydF4y2Ba16gydF4y2Ba医源性震颤麻痹1与高剂量的安定药物治疗精神疾病,2与血管性痴呆,gydF4y2Ba17gydF4y2Ba7与tauopathies或TDP proteinopathy(1额颞叶痴呆患者,gydF4y2Ba18gydF4y2Ba与CBD 3 PSP, 2, 1 anti-IgLON5抗体),和6实现肌萎缩性脊髓侧索硬化症的诊断标准gydF4y2Ba19gydF4y2Ba(gydF4y2Ba表1gydF4y2Ba)。招募病人没有神经紊乱的家族历史。gydF4y2Ba
神经源性直立性低血压成立了减少至少20/10毫米汞柱没有显著变化的心率挡风玻璃倾斜试验在65°(3分钟)gydF4y2Ba12gydF4y2Ba与直立性低血压的PD。通过细微精神状态检查纠正确定认知恶化(≤24)和简短的心理恶化电池,神经心理测试标准化在意大利人口表达全球认知障碍当最后的分数是- (< 0)。gydF4y2Ba20.gydF4y2Ba
招募病人的临床诊断是由适当的诊断仪器测试(gydF4y2Ba表1gydF4y2Ba)。Ioflupane [gydF4y2Ba123年gydF4y2Ba我黑的SPECT多巴胺活动显示,所有异常发现synucleinopathies除了拥堵的患者。黑SPECT扫描的低利率non-synucleinopathies是由于缺乏运动参与的几乎一半的病人显示一个孤立的痴呆。脑部核磁共振成像显示典型的异常在下文和广告支持临床诊断(皮质萎缩),MSA (putaminal萎缩或hyperintense putaminal rim,十字面包,和脑干萎缩),和tauopathies TDP proteinopathy(皮质、脑干萎缩)。此外,心脏吸收的gydF4y2Ba123年gydF4y2Ba我-MIBG SPECT在11个病人因为足够的诊断准确性已经通过其他的手段诊断测试或者因为患者无法执行测试。心脏MIBG SPECT显示同情去神经在所有synucleinopathies(7例),除了MSA(4)患者,结果显示正常。gydF4y2Ba
REM睡眠行为障碍(RBD)的存在已被证实在所有招募病人的临床访谈床病人和他们的合作伙伴。RBD患者决心在17 synucleinopathies床边伙伴描述频繁的历史清楚梦想制定(gydF4y2Ba表1gydF4y2Ba)。障碍研究中执行5例报告RBD (3 PD和2 MSA)和确认没有弛缓的快速眼动睡眠。招募患者用左旋多巴治疗帕金森症患者有或没有多巴胺受体激动剂和胆碱酯酶抑制剂的变量组合,美金刚胺,选择性5 -羟色胺再摄取抑制剂患者痴呆。gydF4y2Ba
在比较研究中,24例神经退行性疾病的神经障碍患者没有证据也招募了。其中包括7小纤维神经病患者由于糖尿病或自身免疫性疾病,与特发性周围神经病变5,1与慢性炎性脱髓鞘多神经病,与韦尼克脑病,1 2大脑血管炎,1 stiff-person综合症,与主观认知障碍,2和5有严重抑郁症脑MRI显示正常,认知测试,脑脊液神经退化的标志(gydF4y2Ba表1gydF4y2Ba)。所有招募患者进行皮肤活检;腰椎穿刺收集脑脊液进行只有在患者诊断所必需的。CSF在9 synucleinopathies患者,因此可用24 non-synucleinopathies患者和16控制。免疫荧光和RT-QuIC分析了盲法临床诊断。gydF4y2Ba
主要研究问题需要解决在这个研究是免疫荧光的再现性和免疫荧光诊断准确性和RT-QuIC synucleinopathies有别于non-synucleinopathies和控制患者。这项研究提供了第三类证据表明免疫荧光是可再生的,免疫荧光或RT-QuIC准确区分synucleinopathies non-synucleinopathies。gydF4y2Ba
标准协议的审批、登记和病人同意gydF4y2Ba
本研究获得批准从一个人体实验伦理标准委员会(机构)对任何实验使用人类对象和过程遵循赫尔辛基宣言有关人类的临床研究。书面知情同意了所有的病人(或监护人)参与研究(研究同意)。gydF4y2Ba
皮肤活组织检查gydF4y2Ba
3毫米打孔切片从近端和远端毛皮肤网站。患者招募本研究进行了两个常规诊断皮肤活检研究协议和协议用于这项研究(gydF4y2Ba图1gydF4y2Ba)。常规诊断协议包括一对皮肤样本,间隔约3厘米在一条水平线,从近端(C7脊椎旁:5厘米的中线)和远端站点(髌骨大腿:15厘米以上;外踝和腿:10厘米以上)。两个皮肤样品被每一个站点增加磷酸化率α-synuclein (p-syn)积极性如前所述。gydF4y2Ba8gydF4y2Ba,gydF4y2Ba21gydF4y2Ba研究协议提供另外2双样品取自一个皮肤网站分开2 - 3厘米总共8个样本/病人(gydF4y2Ba图1gydF4y2Ba)。皮肤网站从研究协议被选为研究考虑的概率p-syn皮肤神经,这是受特定的临床表型的影响。gydF4y2Ba8gydF4y2Ba因此,近端皮肤网站主要是选择帕金森症患者和痴呆(C7,对应于协议IIIgydF4y2Ba图1gydF4y2Ba),而在自主或神经性疾病,患者远端网站(L =远端大腿腿和T =,协议I和II相对应,分别gydF4y2Ba图1gydF4y2Ba)主要是选择。然而,当病人尤其兼容的,两个不同皮肤的网站进行分析研究协议(10个样本/病人)患者1例PD患者和4 PSP的免疫荧光再现性研究和2 PD患者和1患者广告的比较研究。免疫荧光的再现性分析确定了额外的一对皮肤样本接近常规样品相同的免疫荧光方法详细解释如下。相比之下,比较研究的常规的皮肤样品免疫荧光分析的比较与额外的一双RT-QuIC皮肤样品分析。每个对皮肤样品选择的免疫荧光或比较研究匿名通过使用数值代码允许盲法分析。gydF4y2Ba
如果分析搜索P-Syn存款皮肤神经gydF4y2Ba
根据以前公布的程序,gydF4y2Ba4gydF4y2Ba,gydF4y2Ba6gydF4y2Ba,gydF4y2Ba21gydF4y2Ba皮肤样本立即固定在冷Zamboni固定剂和一夜之间保持在4°C。gydF4y2Ba
Ten-micrometer部分得到使用低温恒温器(1950厘米;鹿田徕卡,IL)。三个部分500μm除了皮肤样本进行了分析。他们一夜之间double-immunostained面板主要包括兔单克隆抗体的磷酸化α-synuclein Ser 129 (p-syn;1:50 0,Abcam,剑桥,英国;猫。不。ab - 51253)和鼠标pan-neuronal标记9.5蛋白基因产物(1:750;Abcam;猫。 no. ab72911). Sections were then washed and secondary antibodies were added for an incubation of 1 hour. As for secondary antibodies, an anti-mouse Alexa Fluor 488 (1:400; Jackson ImmunoResearch, West Grove, PA; cat. num. 715-545-150) and rabbit cyanine dye fluorophores 3.18 (1:200, Jackson ImmunoResearch; cat. num. 711-165-152) were used. The microscope analysis and criteria followed to define a p-syn positivity were described previously and mainly based on the correspondence between rabbit p-syn and mouse PGP staining.4gydF4y2Ba,gydF4y2Ba6gydF4y2Ba,gydF4y2Ba8gydF4y2Ba,gydF4y2Ba21gydF4y2Ba两位作者在immunofluorescent与专业分析(V.D.和人工智能)分析了免疫荧光图像盲的临床诊断。intralaboratory分析揭示了一个优秀的再现性,有100%的一致性分类的所有患者(K = 1),与最近报道数据一致。gydF4y2Ba22gydF4y2BaP-syn染色被评为积极当一个皮肤神经纤维显示阳性染色高倍镜(2×40)接近皮肤样品。因为明确的不同组之间的差异没有p-syn积极性non-synucleinopathies和控制患者,p-syn分布的定量分析没有进行这项研究。然而,对于了p-syn PGP,我们进行分析通过收购数字图像使用激光扫描共焦显微镜(尼康共焦显微镜,Eclipse Ti A1,日本)如前所述。gydF4y2Ba21gydF4y2Ba
RT-QuIC病理α-Synuclein播种活动的分析gydF4y2Ba
皮肤和脑脊液样本的准备gydF4y2Ba
皮肤穿孔活检样本(∼∼30毫克,3×3毫米)包括表皮和真皮层。2冷冻皮肤样本准备RT-QuIC分析如前所述gydF4y2Ba10gydF4y2Ba,gydF4y2Ba23gydF4y2Ba,gydF4y2Ba24gydF4y2Ba与一些细微的修改。每一个皮肤样本分别进行了分析。的皮肤组织洗3次1×Tris-buffered盐水(TBS)分隔成小块的菜。皮肤匀浆在10% (w /卷)准备在皮肤包含2毫米CaCl裂解缓冲gydF4y2Ba2gydF4y2Ba和0.25% (w /卷)胶原酶(罗氏)在TBS和孵化为4小时用颤抖的37°C,紧随其后的是均质化Mini-Beadbeater (BioSpec;实验室供应网络公司,阿特金森,NH) 1分钟。声波降解法后,样本离心机,享年500岁gydF4y2BaggydF4y2Ba3分钟收集上层的分数(S1)。总共∼60 - 100µL整除的为每个病人CSF保持在−80°C的冰箱RT-QuIC化验。gydF4y2Ba
RT-QuIC分析gydF4y2Ba
皮肤或脑脊液样本的RT-QuIC分析如前所述,gydF4y2Ba10gydF4y2Ba,gydF4y2Ba23gydF4y2Ba,gydF4y2Ba24gydF4y2Ba与一些细微的修改。总之,混合RT-QuIC反应是由40毫米磷酸盐缓冲剂(pH值8.0),170毫米氯化钠,0.1毫克/毫升重组人类野生型α-synuclein购买商业(rPeptide Watkinsville, GA), 10µM Thioflavin T(阻),和0.00125%的十二烷基硫酸钠。整除的98年或85年µL反应混合/每个被加载到黑色的96孔板和一个清晰的底部(Nunc)预装∼5玻璃珠(直径1毫米)和种子2µL皮肤匀浆S1或15µL CSF。皮肤匀浆或脑脊液样本2000gydF4y2BaggydF4y2Ba2分钟前4°C系列稀释。板与板封口机密封膜(耐尔根Nunc国际)孵化在42°C BMG FLUOstarω板读者周期1分钟的震动(400 rpm双轨道)和1分钟休息指定的培养时间。测量的荧光(450±10海里励磁和480±10海里排放;每45分钟读)进行。四个复制相同的反应被播种稀释为每个单独的样本。每个样本的平均荧光值计算使用荧光值从所有4复制井无论这些值越过阈值下面描述。最大荧光响应(260000 rfu)板的读者是策划和不同时间点的测量。播种活动列为RT-QuIC积极基于标准类似前所述RT-QuIC大脑标本的分析。gydF4y2Ba10gydF4y2Ba皮肤RT-QuIC被认为是积极的反应,至少1 2为每个皮肤样本分析网站。荧光阈值为一个积极的反应是基于所有负控制样品的意思吗,值在60小时,+ 3 SDs。至少2 4复制井必须跨越这个门槛和滞后阶段在不到50个小时为了一个样本被认为是积极的。RT-QuIC荧光信号报告从每个皮肤分析网站的最大价值2样品分析。gydF4y2Ba
统计分析gydF4y2Ba
这个分析是使用SPSS 25.0进行。Kolmogorov-Smirnov测试是用来验证连续变量的正态分布。学生gydF4y2BatgydF4y2Ba测试或1路的方差分析,后跟一个事后Bonferroni测试被用于正态分布数据的比较。Mann-WhitneygydF4y2BaUgydF4y2Ba测试或利用克鲁斯卡尔-沃利斯检验比较变量没有被正态分布。使用χ分类变量进行比较gydF4y2Ba2gydF4y2Ba测试结果给出了绝对和相对频率(%)。调整结果年龄、性别、和疾病持续时间,我们进一步使用物流或多元线性回归取决于数据。协议是使用科恩k统计数据进行了测试。对所有分析,意义是假定gydF4y2BapgydF4y2Ba< 0.05,Bonferroni-corrected多重比较。敏感性,特异性,阳性预测值,阴性预测值,计算和精度不同的诊断技术使用临床诊断的金标准。gydF4y2Ba
数据可用性gydF4y2Ba
生成的数据集和分析在当前研究可从相应的作者以合理的要求。gydF4y2Ba
结果gydF4y2Ba
招募的病人和对照组与年龄和疾病持续时间。男性更普遍在每组患者除了non-synucleinopathies免疫荧光vs RT-QuIC,用于比较,女性更代表(gydF4y2Ba表1gydF4y2Ba)。正如所料,在synucleinopathies RBD发病率非常普遍,没有non-synucleinopathies或控制患者伴有睡眠障碍。也正如预期的那样,黑DaTscan异常患者更普遍比那些non-synucleinopathies synucleinopathies和控制,但脑MRI异常相似的招募患者(gydF4y2Ba表1gydF4y2Ba),尽管每组的特定类型的异常不同,如预期。gydF4y2Ba
免疫荧光染色的病理P-Syn皮肤神经gydF4y2Ba
P-syn染色皮肤神经之间的2对邻近皮肤样品在所有网站(gydF4y2Ba表2gydF4y2Ba)。在所有29皮肤网站分析(19 C7 8远端腿,大腿和2),p-syn显示相同的结果,支持一对皮肤样品之间的比较分析与一对相邻的免疫荧光分析使用不同的技术。gydF4y2Ba
考虑样本选择的比较研究中,p-syn积极性披露在所有synucleinopathies除了3例与MSA(2, 1),但重要的是,它没有发现任何non-synucleinopathies或控制的病人。p-syn的拥堵的病人负选择的皮肤样本而不是积极的在这两个额外的常规分析皮肤网站,也就是说,C7和腿部,而MSA患者没有p-syn在选定的样本-甚至在例行分析C7和大腿网站。常规免疫荧光分析(包括额外的2或4皮肤样本和6或12部分)并没有透露任何p-syn积极性non-synucleinopathies和控制患者同意研究皮肤样品选择的结果。p-syn积极性synucleinopathies患者之间的不同,主要是在自主发现PD的纤维,下文,拥堵,但发现在躯体上真皮的纤维MSA,确认之前的数据。gydF4y2Ba7gydF4y2Ba,gydF4y2Ba25gydF4y2Ba,gydF4y2Ba26gydF4y2Ba敏感性和特异性的分析表明,p-syn提出的判别synucleinopathies诊断精度高non-synucleinopathies和控制与敏感性90%,特异性100% (gydF4y2Ba表3gydF4y2Ba)。逻辑回归模型显示,没有影响力的年龄、性别、或疾病持续时间的结果。gydF4y2Ba
RT-QuIC病理α-Synuclein播种活动的评价gydF4y2Ba
RT-QuIC皮肤样品的测定gydF4y2Ba
皮肤穿孔活检的病理α-synuclein播种活动的3组患者的样本被RT-QuIC试验检测。截止值定义积极播种活动是45414(属性单元(au))基于均值α-synuclein播种活动控制+ 3 SDs。皮肤RT-QuIC化验了敏感性86%,特异性80% (gydF4y2Ba表3gydF4y2Ba)在披露synucleinopathies,低于免疫荧光由于38例9 non-synucleinopathies显示积极α-synuclein年中荧光反应。另外,3的24控制患者表现出积极α-synuclein阻氢荧光反应(gydF4y2Ba表4gydF4y2Ba)。积极non-synucleinopathies和控制患者没有任何临床症状的帕金森症,神经异常,小脑功能障碍的时候招聘或认真的临床评估后进行14±3个月(平均±SE)。平均皮肤α-synuclein阻氢荧光反应患者synucleinopathies (n = 31)从患者显著高于non-synucleinopathies (n = 38) (125.575±10.525 (SE)和41.295±5.674,非盟,gydF4y2BapgydF4y2Ba< 0.001,gydF4y2Ba图2gydF4y2Ba),从控制(n = 24) (125.575±10.525 vs 29.073±4.064,非盟,gydF4y2BapgydF4y2Ba< 0.001)(gydF4y2Ba图3一gydF4y2Ba),分别。RT-QuIC反应是高于控制病人甚至只考虑3积极控件(125.575±10.525 vs 73.744±13.047;gydF4y2BapgydF4y2Ba= 0.10)。相比之下,没有显著差异皮肤α-synuclein年中non-synucleinopathies和控制之间的荧光强度(41.295±5.674 vs 29.073±4.064,非盟,gydF4y2BapgydF4y2Ba= 0.359)(gydF4y2Ba图3一gydF4y2Ba)。年龄、性别、和疾病持续时间并不影响结果通过使用逻辑回归模型。gydF4y2Ba
RT-QuIC脑脊液样本的测定gydF4y2Ba
接下来,CSF的α-synuclein播种活动也被RT-QuIC化验。截止点定义54.473的积极播种活动阻氢荧光(au)基于均值CSFα-synuclein年中荧光强度的控制+ 3 SDs。CSF RT-QuIC结果产生的敏感性为78%,特异性100% (gydF4y2Ba表2gydF4y2Ba)在披露synucleinopathies没有任何non-synucleinopathies和控制患者显示积极α-synuclein播种活动(gydF4y2Ba表3gydF4y2Ba)。从患者平均脑脊液α-synuclein阻氢荧光强度synucleinopathies (n = 9)从患者显著高于non-synucleinopathies (n = 24) (88.137±14.177 (SE)和32.695±3.819,非盟,gydF4y2BapgydF4y2Ba< 0.01)和控制(n = 16) (88.137±14.177 vs 25.723±2.442,非盟,gydF4y2BapgydF4y2Ba< 0.01)。相比之下,没有显著差异CSFα-synuclein年中non-synucleinopathies和控制之间的荧光强度(32.695±3.819 vs 25.723±2.442,非盟,gydF4y2BapgydF4y2Ba= 0.45)(gydF4y2Ba图3 bgydF4y2Ba)。回归模型显示,没有影响力的年龄、性别、或疾病持续时间的结果。gydF4y2Ba
免疫荧光检测病理α-Synuclein vs RT-QuICgydF4y2Ba
皮肤神经披露的p-syn染色免疫荧光显示良好的协议与CSF RT-QuIC试验(κ= 0.9;gydF4y2BapgydF4y2Ba< 0.001),但该协议降低了皮肤RT-QuIC(κ= 0.6;gydF4y2BapgydF4y2Ba< 0.001)由于积极的皮肤样品检测通过RT-QuIC non-synucleinopathies(κ= 0.2;gydF4y2BapgydF4y2Ba= 0.08)和对照组(κ= 0.3;gydF4y2BapgydF4y2Ba< 0.05)。出于同样的原因,皮肤与CSF RT-QuIC RT-QuIC显示低协议考虑所有招募患者(κ= 0.6;gydF4y2BapgydF4y2Ba< 0.001),但该协议在synucleinopathies最优(κ= 1;gydF4y2BapgydF4y2Ba< 0.001)。gydF4y2Ba
χgydF4y2Ba2gydF4y2Ba试验表明,免疫荧光歧视比RT-QuIC synucleinopathies之间的积极的和消极的患者之间,non-synucleinopathies和控制患者(χgydF4y2Ba2gydF4y2Ba免疫荧光= 80.1,χgydF4y2Ba2gydF4y2Ba为皮肤RT-QuIC = 37.8,χgydF4y2Ba2gydF4y2BaCSF RT-QuIC = 36.3;gydF4y2BapgydF4y2Ba< 0.0001)。gydF4y2Ba
讨论gydF4y2Ba
我们研究的主要发现是,(1)免疫荧光和RT-QuIC显示诊断精度高区分synucleinopathies不同神经退行性和其他神经系统疾病,虽然免疫荧光显示更好的价值以及最佳再现性;和(2)这些技术提出了一个很好的协议,支持他们相等的诊断目的,尽管该协议与皮肤RT-QuIC non-synucleinopathies患者低。gydF4y2Ba
synucleinopathies正确诊断的患者是一个突出的挑战几个影响生活。寻找一些生物标记物在进步,但一个诊断测试高敏感性和特异性不是目前可供synucleinopathies,尽管急需。因为自主症状可能会先于古典synucleinopathy的症状,如帕金森病的运动功能障碍或痴呆在下文,gydF4y2Ba4gydF4y2Ba反映神经节后交感神经分支的早期损伤、周围组织广泛的自主神经支配,如皮肤,可能是一个有用的目标站点在搜索α-synuclein骨料的病理形态。皮肤样品来确定synucleinopathies生物标志物的使用也是有前途的考虑到皮肤活检是一种微创的手术。错误折叠的形态学鉴定α-synuclein聚集在皮肤神经p-syn通过免疫荧光synucleinopathies据报道在所有变量,允许这些障碍疾病的区别不同的起源或从健康对照组。gydF4y2Ba4gydF4y2Ba,gydF4y2Ba- - - - - -gydF4y2Ba,gydF4y2Ba8gydF4y2Ba,gydF4y2Ba25gydF4y2Ba额外的数据表明,p-syn皮肤神经也可以用来区分MSA和PDgydF4y2Ba7gydF4y2Ba,gydF4y2Ba26gydF4y2Ba或简单的PD PD与直立性低血压。gydF4y2Ba21gydF4y2Ba此外,它最近的荟萃分析证明皮肤活检提供最好的诊断准确性披露异常α-synuclein存款PD患者。gydF4y2Ba27gydF4y2Ba此外,免疫荧光作为诊断工具的可靠性一直是由优秀的多个实验室的和intralaboratory再现性。gydF4y2Ba22gydF4y2Ba
RT-QuIC曾开发使用CSF作为朊病毒疾病的诊断工具gydF4y2Ba9gydF4y2Ba或皮肤组织。gydF4y2Ba23gydF4y2Ba,gydF4y2Ba24gydF4y2Ba这个测试最近适应检测病理α-synuclein的播种活动大脑,CSF或皮肤样品gydF4y2Ba10gydF4y2Ba,gydF4y2Ba28gydF4y2Ba,gydF4y2Ba29日gydF4y2Ba从PD和诊断精度高的小黑裙。虽然结果是承诺和支持的临床使用这种技术,再现性研究越来越多的情况下缺乏。gydF4y2Ba
免疫荧光和病理α-synuclein RT-QuIC探索不同形式。免疫荧光的病理形态学的形式披露α-synuclein在皮肤神经纤维识别磷酸化的ser129α-synuclein与构象的原生状态的变化与特定的抗体。gydF4y2Ba25gydF4y2Ba相比之下,RT-QuIC揭示病理α-synuclein的聚合行为,gydF4y2Ba23gydF4y2Ba,gydF4y2Ba24gydF4y2Ba一个prion-like错误折叠蛋白质的功能。出于这个原因,重要的是比较两方法的诊断准确性synucleinopathy披露。这方面的澄清可能改善他们采用作为synucleinopathies诊断工具在临床实践中。gydF4y2Ba
我们的研究表明,免疫荧光染色的p-syn皮肤神经显示左右最佳再现性的大量样本中synucleinopathies和non-synucleinopathies。我们发现,免疫荧光和RT-QuIC表现出良好的协议(主要是脑脊液),支持他们相等作为synucleinopathies诊断工具。的具体原因正皮肤RT-QuIC和负免疫荧光之间的差异,即使在常规分析,在一些non-synucleinopathies和控制患者仍有待澄清。因为2方法确定2α-synuclein骨料的不同方面正如上面提到的,可能需要在未来被排除在外,有非α-synuclein总量在一定条件下患者的皮肤和那些聚合只能被RT-QuIC prion-like播种活动但不是通过免疫荧光抗体的磷酸化。因此,这一发现可能的表达copathology non-synucleinopathies(混合病理学)。gydF4y2Ba29日gydF4y2Ba同样,α-synuclein聚集在皮肤上的神经病变患者样本可以解释为一个附带synucleinopathy偶尔发现的死者的尸检没有显示临床表型。此外,intraneural p-syn存款免疫荧光探测到周围神经病变患者可能没有被发现,因为周围神经纤维的减少。然而,这个假设被拒绝,没有p-syn在这些患者即使在网站可能保存皮肤神经支配颈和大腿网站在常规分析。我们仔细地重新评估患者non-synucleinopathies和控制患者发现积极的皮肤RT-QuIC试验,但没有临床症状归因于synucleinopathy可以发现,尽管排除这种可能性的病人应该接受更广泛的临床随访。gydF4y2Ba
单个测试的诊断准确性的分析强调RT-QuIC呈现高敏感性和特异性识别synucleinopathies,最近报道。gydF4y2Ba30.gydF4y2Ba然而,在我们的研究中,我们发现,诊断精度是由免疫荧光就越大。事实上,这个测试提供更高的灵敏度,synucleinopathies p-syn阳性患者的90%,最高的特异性,p-syn所有non-synucleinopathies和控制患者的染色是负数。然而,它应该强调低数量的患者CSF RT-QuIC可能负责这个测试的低灵敏度与免疫荧光相比。gydF4y2Ba
目前的研究提出了以下的局限性:(1)缺乏autopsy-confirmed招募病人的诊断。这是一个很大的限制,尽管我们招募仅供本研究患者实现接受临床标准同意拨款诊断工具的结果。然而,免疫荧光或脑脊液RT-QuIC试验找到了一个明确的调查患者的3组之间的差异,支持招募病人的正确选择;(2)诊断准确性检测皮肤样品的synucleinopathy可能被低估,因为分析已几乎总是做在一个皮肤网站解决的特定的临床表型,如帕金森病和下文近端皮肤网站gydF4y2Ba25gydF4y2Ba和MSA在远端网站,gydF4y2Ba25gydF4y2Ba,gydF4y2Ba26gydF4y2Ba,gydF4y2Ba31日gydF4y2Ba,gydF4y2Ba32gydF4y2Ba为了简化研究协议,降低活检从每个病人的数量。然而,异常聚集α-synuclein可能不是均匀分布在皮肤神经和一个站点可能不足以检测准确。类似的情况一直在观察RT-QuIC化验prion-seeding活动身体皮肤组织来自不同地区的尸体与克雅二氏症诊断神经病理学;在某些情况下,积极的prion-seeding活动并不总是发现在所有三个不同样本和1或2皮肤区域没有表现出可检测prion-seeding活动gydF4y2Ba23gydF4y2Ba;(3)缺乏定量核磁共振分析更好的区分tauopathies synucleinopathies或TDP proteinopathies。然而,诊断精度高synucleinopathies达成通过异常特征在不同的诊断工具,如核磁共振、黑SPECT,心脏MIBG SPECT或挡风玻璃倾斜试验。gydF4y2Ba
本研究的重要课题的体内诊断synucleinopathies通过比较免疫荧光和RT-QuIC,最近2描述高级技术披露病理α-synuclein的聚合物。我们的数据表明,这两种技术显示诊断精度高区分synucleinopathies从其他神经退行性神经系统疾病,虽然免疫荧光显示更好的价值,以及最优的再现性。此外,这两个诊断工具显示在披露synucleinopathy好协议,支持使用微创临床实践的测试如皮肤免疫荧光或RT-QuIC代替CSF作为synucleinopathies诊断工具。gydF4y2Ba
研究资金gydF4y2Ba
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作者报告没有利益冲突。去gydF4y2Ba首页Neurology.org/NgydF4y2Ba为充分披露。gydF4y2Ba
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作者感谢约翰尼见鬼校对手稿。gydF4y2Ba
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